Données précliniques

Études toxicologiques
Résumé d’une étude in vivo sur un modèle de plaie
Une étude avec analyse de la toxicité après une utilisation d’Apligraf a été menée sur des souris SCID présentant une plaie. Au total, 22 mâles et 22 femelles (tous les animaux étaient immunodéprimés) ont été répartis en deux groupes. Le groupe témoin (plaie seulement) comprenait 7 animaux par sexe et le groupe «actif» (avec Apligraf) comprenait 15 animaux. Les soins de plaie standard ont été également prodigués aux deux groupes. Une plaie chirurgicale, induite chez toutes les souris du test, a été traitée soit par Apligraf plus soins standard, soit par soins standard seuls. Pendant l’étude, les paramètres suivants ont été examinés: mortalité/morbidité, observations cliniques, prise de nourriture, poids, hématologie et réactions chimiques. Après 28 jours, des échantillons tissulaires ont été prélevés, pesés et analysés.
Le résultat de l’étude n’a pas mis en évidence de différence significative entre les deux groupes. Aucune différence cliniquement significative n’a été notée entre les groupes en termes de poids ou de poids absolu ou relatif des organes.
Une tendance ayant atteint le seuil de significativité pour les deux sexes a été notée dans le groupe actif en faveur d’une réduction des globules rouges et de l’hématocrite. Une tendance en faveur d’une augmentation de la TGMH et de la CCMH a été observée dans le groupe actif. Cette différence a atteint le seuil de significativité statistique chez les souris femelles. Ces résultats sont comparables avec l’hémolyse, également concernant l’absence d’anomalies de la moelle osseuse. Des augmentations statistiquement significatives de la numération relative des neutrophiles chez les souris mâles et des lymphocytes chez les souris femelles ont également été notées, mais le nombre absolu des cellules en question et des globules blancs n’a pas augmenté. Ces résultats isolés ne sont pas biologiquement pertinents.
Au niveau des échantillons tissulaires (histopathologie), des différences attendues ont été observées dans le groupe actif. Ces différences ne sont pas inhabituelles en réaction à une xénogreffe. Aucune étude spécifique sur la carcinogénicité n’a été réalisée avec Apligraf. Au cours des études mentionnées plus haut, aucune néoplasie n’a été notée au niveau des plaies ou des organes des animaux examinés. De petites différences tissulaires ont été notées, mais ces dernières ne sont pas inhabituelles chez ces animaux de laboratoire. Leur incidence et leur sévérité ne montraient aucune corrélation avec les animaux utilisés.
Études immunologiques
Les études précliniques ont montré que les composantes cellulaires d’Apligraf ne causaient pas de réaction immunitaire avec les lymphocytes T allogènes. De plus, des souris présentant un déficit immunitaire combiné sévère (SCID) et recevant des lymphocytes périphériques humains, n’ont pas montré de réaction de rejet aigu envers Apligraf. En revanche, les mêmes souris ont rejeté les greffes de peau mince humaine allogène.
Sécurité microbiologique
Une transmission de germes infectieux est très improbable mais ne peut pas être totalement exclue.
Une transmission de la BSE à l’être humain ne peut pas être totalement exclue car un extrait d’hypophyse bovine est utilisé lors de la fabrication d’Apligraf.
Les banques de cellules mères (Master Cell Banks, MCBs) fournissant les HDF et les HEP sont soumises à des examens microbiologiques stricts. Les paramètres suivants en font partie: stérilité, mycoplasmes, contaminations in vitro et in vivo par des virus, microscopie électronique en transmission des particules de type viral («viruslike particles»), activité rétrotranscriptase, VIH-1 et 2, HTLV-I et II, VHA, HBsAg, VHC, CMV, VEB, papillomavirus humain, virus de l’herpès humain de type 6 (HHV-6) et de type 7 (HHV-7). Pour la fabrication des MCBs, du sérum d’hypophyse bovine (d’un pays de catégorie B) est actuellement utilisé. Seules les MCBs satisfaisant à toutes les exigences de sécurité sont utilisées pour générer les banques de cellules de travail (working cell banks = WCB). Les WCBs pour les HDF et les HEP sont soumises à un programme d’analyse réduit concernant la stérilité, les mycoplasmes et contamination virologique in vitro et in vivo.
Le collagène de type I, une composante structurelle d’Apligraf, est issu de tendons de veau. Ces derniers proviennent des États-Unis. Les analyses microbiologiques, dont dépend l’autorisation d’utilisation du collagène bovin purifié, comprennent les paramètres suivants: stérilité (bactéries/champignons), endotoxines, mycoplasmes, polyomavirus bovin, papillomavirus bovin et test intensif des virus bovins avec des cellules indicatrices sensibles au virus de la diarrhée bovine (BDV), au virus de l’herpès bovin (BHV-1), au virus para-influenza de type 3 (PI3), à l’adénovirus bovin (BAV), au parvovirus bovin (BPV), au réovirus et au rotavirus bovin (BRV). Tout le matériel d’origine animale utilisé dans la production de matières premières et la fabrication du produit final est analysé à la recherche de contaminations potentielles par des agents infectieux sauf ceux de l’encéphalopathie spongiforme transmissible. Les tests sont réalisés par le fournisseur et/ou le fabricant d’Apligraf et doivent donner des résultats négatifs pour permettre l’utilisation du matériel pour la fabrication d’Apligraf.